禹重科技-行业知识：12种真菌毒素检测，一针尽在掌握
真菌毒素是真菌在适宜条件下产生的有毒次级代谢产物，能够引发人类、动物各种急、慢性疾病。我国高度重视真菌毒素污染问题，GB 2761-2017 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量 规定了食品中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、展青霉素、赭曲霉毒素A及玉米赤霉烯酮的限量指标。据报道我国每年有3100万吨粮食在生产、储存、运输过程中被真菌污染，约占粮食年总产量的6.2%。为了保证我国粮食质量安全，避免不必要的经济损失，及时快速监测真菌毒素污染种类、水平及其风险尤为重要。
由于真菌毒素种类多样，且存在协同污染，为确保全面、快速的了解粮食中真菌毒素的污染情况，迫切需要一种简单、快速、灵敏、同时准确测定粮食中多种真菌毒素的方法。目前真菌毒素的前处理检测方法主要有酶联免疫吸附法、免疫亲和柱方法等。
基于抗原抗体相互作用的酶联免疫吸附法虽有较高的选择性，但无法准确定量，同时由于前处理简单，没有有效的净化，易受基质干扰，产生假阳性。免疫亲和柱前处理净化方法由于其特异性吸附，净化效果好，但是一方面操作复杂，另外一方面成本较高，不适合大规模检测。
给大家分享使用QuEChERS作为前处理净化的方法，操作简单，重复性好，回收率高。采用Accucore aQ HPLC 色谱柱分离，表面多孔增强核技术的运用,兼容100%水相，同时增强了对极性化合物的保留及选择性。采用LC-MS/MS方法，15min内快速完成低浓度真菌毒素的分析，该方法完美适合于粮谷中多种真菌毒素的分析检测。
样品前处理
1.样品提取
（1）称取5g均质后的样品放入50mL离心管中，加入10 mL 水，震摇15 min
（2）再加入10mL 2%甲酸乙腈，旋涡混合1min
（3）加入HyperSep萃取盐包(P/N 60105-332-B：4g MgSO₄,1g NaCl) ，快速震摇1min.
（4）≥3000g 离心5min
2.样品净化
（1）移取1mL上清液到HyperSep净化管中（P/N：60105-204-B：QuEChERS 2mL 离心管 带150mg MgSO₄, 50mg PSA 50mg C18 ），震摇30s， ≥3000g 离心5min
（2）移取500μL净化液，使用纯水稀释4倍，过0.2μm滤膜后上机检测
色谱条件
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色谱柱 |
Accucore aQ, 100 × 2.1 mm, 2.6 μm(P/N 17326-102130) |
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柱温 |
35 ℃ |
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进样量 |
10 µL |
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流动相 |
A0.1%甲酸水B0.1% 甲酸乙腈 |
表1.梯度洗脱程序
质谱条件
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离子源 |
电喷雾离子源 |
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质谱扫描方式 |
多重反应监测模式（MRM） |
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锥孔电压 |
3.0kV |
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加热气温度 |
500℃ |
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离子源温度 |
150℃ |
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脱溶剂气 |
800L/H |
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选择反应监测离子对信息见下表 |
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表2.化合物及质谱采集参数
实验结果
标准品及样品加标谱图
图1.12种真菌毒素标准溶液图谱（浓度见表3）
图2.玉米中12种真菌毒素加标图谱（加标浓度见表3）
采用上述分析方法，12 种真菌毒素在15 min内均可获得良好的色谱峰，图1为 12种真菌毒素标准溶液图谱（浓度见表3），各化合物灵敏度测试结果见表3，LOD在0.1-2ug/kg之间。12 种真菌毒素相对标准偏差RSD% 均小于15%（见表3）
表3.12种真菌毒素回收率数据及LOD
结论
开发了一种快速简单的QuEChERS前处理方法用于粮谷中12种典型真菌毒素的分析，使用Accucure aQ表面多孔增强核色谱柱，增强了对极性化合物的保留及选择性，峰形良好。采用LC-MS/MS方法，15min内快速完成低浓度真菌毒素的分析，并获得较好的回收率，回收率范围60-110%，LOD为0.1-2 ug/kg，该方法完美适合于粮谷中多种真菌毒素的分析。
参考文献：
1 Determination of Multiple Mycotoxins in Grain Using a QuEChERS Sample Preparation Approach and LC-MS/MS Detection
2. GB 2761-2017 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量
编辑：禹重科技UZonglab